Células competentes
Para los experimentos de clonaje estándar, las células competentes están disponibles en dos formatos: alta eficiencia para clonaje superior a 108 ufc/μg (JM109, HB101) y eficiencia para subclonaje superior a 107 ufc/μg (HB101). Las células JM109 tienen la característica adicional que permite el cribado azul/blanco de recombinantes.
Para la expresión de proteínas, pueden utilizarse células competentes JM109(DE3), BL21(DE3) o KRX. Las Single Step (KRX) Competent Cells están diseñadas para una transformación eficiente y una expresión de proteínas estrictamente controlada. Estas células reúnen los mejores atributos de estos dos pasos en una cepa para evaluar la expresión de proteínas en E. coli.
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¿Qué son las células competentes?
La transformación de bacterias con plásmidos es importante porque las bacterias se utilizan como medio para almacenar y replicar plásmidos. Es más probable que las células de E. coli incorporen ADN externo si sus paredes celulares han sido modificadas, permitiendo que el ADN pueda atravesarlas más fácilmente. Se dice que tales células son "competentes".
Existen dos métodos principales para transformar células bacterianas: el uso de células químicamente competentes y la electroporación. Las células químicamente competentes se crean utilizando una serie de lavados fríos con sal para alterar las membranas celulares, preparando a las células para aceptar ADN plasmídico. Para preparar células electrocompetentes, las células se enfrían y se lavan con agua fría desionizada y glicerol.
Para introducir el plásmido deseado en células químicamente competentes, el ADN plasmídico se mezcla con células refrigeradas y se incuba en hielo para permitir que el plásmido entre en estrecho contacto con las células. A continuación, la mezcla plásmido-célula se calienta brevemente a 45–50°C, permitiendo que el ADN entre en la célula a través de la membrana alterada. La mezcla calentada se vuelve a colocar en hielo para retener los plásmidos dentro de las bacterias.
Para la electroporación, las células competentes también se colocan en hielo con el ADN plasmídico. Sin embargo, la mezcla plásmido-célula se expone a una corriente eléctrica que abre los poros de la membrana celular para que el plásmido pueda entrar en la célula.
Ambos métodos permiten obtener células transformadas de forma eficaz mediante la selección con antibióticos para el plásmido de interés.
