Enzimas de restricción
Promega suministra endonucleasas de restricción de alta calidad y rendimiento probado para cubrir las necesidades de digestión con enzimas de restricción y clonaje. Elije entre un amplio catálogo de enzimas de restricción, incluido un subconjunto de enzimas capaces de digerir rápidamente ADN en 15 minutos o menos.
MULTI-CORE™ Buffer es el tampón universal de enzimas de restricción de Promega, que simplifica las digestiones con múltiples enzimas. La albúmina de suero bovino (BSA) también está disponible para aumentar la estabilidad de las enzimas o para su uso como proteína transportadora.
Types of Restriction Enzymes
Restriction enzymes are grouped into various classes (Types I, II, III and IV) each defined by their structural composition, cleavage specificity, and enzymatic activity requirements. Each type has distinct properties and applications, particularly in genetic engineering and research. Within molecular biology, Type II enzymes are particularly favored for their simplicity and precision in cutting near or at their recognition sites. See table below for further characteristics and details of the enzyme types.
| Type | Characteristic | Recognition Site | Cleavage Pattern |
|---|---|---|---|
| Type I |
|
Non-specific, distant from recognition site | Random, far from recognition site |
| Type II |
|
Specific palindromic sequences | Precise within or near the recognition site, producing defined overhangs or blunt ends |
| Type III |
|
Specific but less palindromic than Type II | Fixed number of bases away from the recognition site |
| Type IV |
|
Specific sequences that are methylated | Varies, typically near the recognition sequence |
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Introducción a las enzimas de restricción
Las enzimas de restricción (endonucleasas de restricción) reconocen secuencias de ADN específicas y de corta longitud denominadas secuencias de reconocimiento o sitios de restricción. Las enzimas de restricción cortan el ADN de doble cadena situado dentro de estas secuencias específicas o adyacente a ellas. Un mapa de una secuencia de ADN que muestra los sitios de restricción presentes en esa secuencia se denomina mapa de restricción. Los mapas de restricción son muy valiosos para el clonaje, la tipificación de ADN y cualquier otro experimento en el que se utilicen enzimas de restricción.
Cada enzima de restricción tiene unas condiciones de reacción en las que funciona mejor. Estas condiciones incluyen la duración y la temperatura de incubación. Las enzimas de restricción suelen venderse con tampones en los que estas tienen una actividad óptima. Utilizar las condiciones de reacción correctas e incubar durante el tiempo adecuado es importante para evitar la actividad star de algunas enzimas. La actividad star se produce cuando una enzima empieza a ser menos específica en los sitios que escinde. La inactivación de la enzima después de la digestión también puede ayudar a prevenir la actividad star.
Dos (o más) enzimas de restricción pueden reconocer la misma secuencia. Se denominan isoesquizómeros. Los isoesquizómeros tienen el mismo sitio de reconocimiento pero pueden diferir en el sitio de corte. Los isoesquizómeros ofrecen flexibilidad en la elección de la enzima en situaciones en las que se necesitan varias enzimas pero no se dispone de tampones o condiciones de reacción compatibles.
