Metabolismo lipídico
Los ensayos de metabolismo lipídico de Promega proporcionan métodos sensibles y sencillos para detectar y cuantificar glicerol, triglicéridos, colesterol y ésteres de colesterol. Estos ensayos pueden utilizarse para la cuantificación de la lipólisis y la lipogénesis, entre otros procesos biológicos. Los ensayos de metabolismo lipídico se basan en la tecnología bioluminiscente básica que se utiliza en otros ensayos de metabolismo de Promega.
Estos ensayos son adaptables a muchas muestras biológicas, incluyendo células cultivadas en monocapa o estructuras 3D, tejidos, medio de cultivo celular, plasma y suero. Los tipos celulares utilizados con los ensayos de metabolismo lipídico incluyen hepatocitos cultivados en monocapa y en 3D y adipocitos. El protocolo no requiere una extracción orgánica, simplificando los pasos de preparación de la muestra. Los ensayos son sensibles con un amplio rango lineal, lo que reduce el número de diluciones de muestras necesarias y aumenta el poder cuantitativo para discriminar pequeños cambios en los niveles de metabolitos lipídicos.
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Introducción a los ensayos de metabolismo lipídico
Las opciones para los ensayos de metabolismo lipídico incluyen ensayos basados en lectores de placas bioluminiscentes para detectar los niveles de glicerol, triglicéridos, colesterol y ésteres de colesterol en muestras biológicas. Estos ensayos son rápidos y fáciles de usar, ya que no requieren extracción orgánica y sólo son necesarios dos pasos de incubación (a 37°C o a temperatura ambiente) proporcionando resultados cuantitativos con el uso de una curva estándar. A diferencia de la tinción y otros métodos que requieren extracción orgánica, estos ensayos bioluminiscentes son fáciles de implementar para los laboratorios que se inician en la investigación del metabolismo lipídico.
Los lípidos desempeñan muchas funciones en un organismo, incluyendo funciones de señalización, actuando como componentes de las membranas biológicas y como una forma de almacenamiento de energía. Los ensayos de metabolismo lipídico permiten comprender los cambios en los niveles de lípidos en muestras biológicas como muestras de cultivos celulares, estructuras celulares 3D cultivadas, tejidos y muestras de plasma o suero.
La alteración del metabolismo lipídico da lugar a diversos trastornos. La esteatosis se refiere a la acumulación aberrante de lípidos en los tejidos. La esteatosis y la medición de los niveles anormales de lípidos en los tejidos son relevantes para la investigación de trastornos metabólicos, como la diabetes, la obesidad y los trastornos hepáticos. La enfermedad del hígado graso no alcohólico (EHGNA) y la esteatohepatitis no alcohólica (EHNA), dos trastornos hepáticos cuya prevalencia está aumentando drásticamente en todo el mundo, son objetivos clave de muchos programas dirigidos al descubrimiento de fármacos. Los ensayos de metabolismo lipídico son herramientas útiles en el estudio de estos trastornos.
La lipólisis es el proceso por el que las células hidrolizan una molécula de triglicérido en tres moléculas de ácidos grasos y una molécula de glicerol. Un aumento de la lipólisis puede medirse como un aumento de los niveles de glicerol libre en muestras de cultivos celulares mediante un ensayo de glicerol.
La lipogénesis es la creación de triglicéridos a partir de una molécula de glicerol y tres moléculas de ácido graso, y es una forma en la que las células almacenan energía. Un aumento de la lipogénesis puede medirse como la cuantificación de triglicéridos intracelulares mediante un ensayo de triglicéridos. Los ensayos de triglicéridos cuantifican los niveles de triglicéridos determinando el nivel total de glicerol, el nivel de glicerol libre y la diferencia resultante es el nivel de triglicéridos.
El colesterol es un componente esencial de las membranas celulares y es necesario para producir hormonas. Sin embargo, un nivel elevado de colesterol circulante se asocia a un mayor riesgo de enfermedades cardiovasculares y aterosclerosis. El colesterol se transporta en el plasma en forma de éster de colesterol, en lipoproteínas de baja densidad (LDL) o lipoproteínas de alta densidad (HDL). Una molécula de éster de colesterol se convierte en una molécula de colesterol mediante la acción de la enzima colesterol esterasa. Los ensayos de colesterol se utilizan para medir el colesterol total (incluidos los ésteres de colesterol) y los niveles de colesterol libre, en diferentes tipos de muestras.