Preprocesamiento y extracción diferencial

Cualquier material biológico es una fuente potencial de ADN que puede ser analizada. Sin embargo, el éxito de la tipificación del ADN depende a menudo de la calidad y la naturaleza de la muestra. Durante una investigación, las muestras suelen recolectarse con hisopos de algodón u otros soportes sólidos. El primer paso para purificar el ADN de esas muestras consiste en retirar el material biológico del soporte sólido, normalmente sumergiendo el material en un tampón acuoso. Algunas muestras, como la sangre y el semen, requieren durante este paso de una digestión con proteinasa K, para obtener el máximo rendimiento y calidad del ADN. La muestra, incluyendo el soporte sólido, se coloca en una spin basket y se centrifuga, haciendo que el líquido fluya a través de la spin basket hacia un tubo de recogida, mientras el soporte sólido permanece en la spin basket. A continuación, el soporte sólido se desecha y la fracción acuosa que contiene ADN se somete a etapas de purificación, para eliminar componentes que pueden interferir en la cuantificación y amplificación del ADN.

Las tarjetas líticas de recogida de muestras son utilizadas por muchos laboratorios como una forma de almacenamiento a largo plazo de muestras de sangre o bucales a temperatura ambiente. Los reactivos que contienen estas tarjetas lisan las células, inactivan las bacterias y hacen que el ADN esté listo para una posterior amplificación. Sin embargo, estos mismos reactivos pueden inhibir la amplificación, a menos que se eliminen previamente mediante extensos procedimientos de lavado. Muchos de los PowerPlex® STR Systems de Promega toleran estos reactivos y permiten la amplificación directa sin necesidad de lavados previos. Aunque las tarjetas líticas son muy utilizadas, no son el único soporte sólido del que disponen los laboratorios para almacenar muestras de sangre o bucales. Las muestras bucales pueden obtenerse con simples hisopos de algodón o papel. Además, existen varias opciones no líticas para almacenar células bucales, como el papel S&S 903. A diferencia de las tarjetas líticas, estos soportes no están impregnados con reactivos que lisan las células, desnaturalizan las proteínas y hacen que el ADN esté listo para la amplificación. Por lo que requieren de un pretratamiento para la lisis y la liberación del ADN. Los hisopos bucales suponen un obstáculo adicional, ya que no se pueden perforar.

El SwabSolution™ Kit es un método sencillo y rápido para generar un extracto a partir de hisopos bucales que puede añadirse directamente a las reacciones PowerPlex®. El PunchSolution™ Kit se utiliza para el pretratamiento de punciones de tarjetas no líticas antes de la amplificación directa mediante los PowerPlex® Systems. 

En la extracción diferencial, se separa el esperma de las células epiteliales. El Differex™ System es una alternativa a los engorrosos métodos manuales, que permite la automatización de la extracción diferencial. Funciona tanto con muestras recientes como con muestras antiguas de agresiones sexuales. Y puede utilizarse en combinación con el DNA IQ™ System y el Slicprep™ 96 Device en dispositivos robóticos para procesar hasta 48 extracciones diferenciales en menos de 5 horas, incluyendo el tiempo de incubación, y con menos de 1 hora de intervención manual.