Ensayos de luciferasa

Comprender de qué modo un promotor o un elemento de respuesta puede controlar la expresión de un gen es más fácil cuando se estudia con un gen reportero. Las enzimas luciferasa son idóneas para los ensayos reporteros, con una detección basada en la luz sencilla y de alta sensibilidad capaz de cuantificar incluso pequeños cambios en la expresión. Aunque los ensayos reporteros suelen utilizarse para evaluar cambios en la actividad promotora, también pueden emplearse para investigar la transducción de señales, la función de proteínas, la regulación de miARN e incluso para medir en tiempo real procesos en organismos vivos.

La base de un ensayo reportero es el vector, el cual porta el gen reportero, junto a los reactivos de detección los cuales proporcionan un sustrato que convierte la actividad de la enzima luciferasa en una señal luminosa. Los reactivos de detección de doble luciferasa atenúan la señal del primer reportero antes de leer la del segundo, lo que permite medir secuencialmente dos reporteros en la misma muestra. El segundo reportero a menudo se incluye como control interno para obtener datos más precisos.

Una vez seleccionado el vector reportero y clonado cualquier elemento (si es necesario), el vector se introduce en células en cultivo, normalmente mediante métodos basados en la transfección, se expresa y se detecta la actividad con reactivos líticos (de punto final) o reactivos de células vivas para medir los cambios en las mismas a lo largo del tiempo. Los ensayos reporteros de luciferasa pueden multiplexarse con otros ensayos para evaluar la apoptosis, el metabolismo, etc. La lectura de los ensayos luciferasa se realiza normalmente utilizando un luminómetro en placa.