Tripsina
La tripsina es una proteasa de serina que escinde de forma específica el lado carboxílico de los residuos de lisina y arginina. La alta especificidad de la tripsina es esencial para la identificación de proteínas, por lo que se ha convertido en el estándar de referencia para la digestión de proteínas a péptidos en el campo de la proteómica "shotgun".
La Trypsin Platinum, Mass Spectrometry Grade, es una proteasa recombinante diseñada para los usuarios que buscan una caracterización precisa de proteínas con espectrometría de masas y RP-HPLC-UV. La Sequencing-Grade Modified Trypsin y la Trypsin Gold, Mass Spectrometry Grade, han sido modificadas mediante metilación reductora, dando lugar a una molécula altamente activa y estable que es extremadamente resistente a la digestión autolítica. La especificidad de la tripsina purificada aumenta aún más mediante el tratamiento TPCK, que inactiva la quimotripsina.
Por otro lado, también ofrecemos una gama de formulaciones de tripsina diseñadas para aplicaciones específicas, incluida la Immobilized Trypsin para la digestión en columnas de centrifugación, la Rapid Digest Trypsin para acortar los tiempos de reacción proteolítica y la Trypsin/Lys C Mix para la digestión de proteínas resistentes a la proteólisis.
Compara características para encontrar la tripsina adecuada a tus necesidades
| Sequencing Grade Trypsin y Trypsin Gold | Trypsin/Lys-C | Rapid Trypsin y Rapid Trypsin/Lys-C | AccuMAP Low pH Digestion Kit | Trypsin Platinum | |
|---|---|---|---|---|---|
| Eficiencia de la digestión | |||||
| Especificidad de escisión | |||||
| Tiempo de digestión | |||||
| Preparación de muestras sin artefactos | |||||
| Estabilidad autoproteolítica | |||||
| Aplicaciones sugeridas | • Proteómica general • Digestión en gel |
• Proteínas difíciles • Cuantificación |
• Resultados rápidos • Alto rendimiento/ Automatización |
• Mapeo de péptidos • Minimizar artefactos |
• Mapeo de péptidos • Máxima especificidad |
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Introducción a las formulaciones de tripsina de Promega
La tripsina es la proteasa más utilizada en la preparación de muestras de espectrometría de masas debido a su elevada actividad proteolítica y especificidad de escisión. La tripsina de alta calidad de Promega se obtiene a partir de tripsina porcina y se modifica para proporcionar la mayor actividad proteolítica y especificidad de escisión.
Sequencing Grade Modified Trypsin
Referenciada en miles de artículos, la tripsina modificada de grado de secuenciación se ha fabricado para proporcionar la máxima especificidad. Está disponible en alícuotas de 20μg o 100μg de producto liofilizado, o como líquido congelado en ácido acético 50mM. Se suministra con tampón de resuspensión, lo que facilita su uso.
Trypsin Gold y Trypsin Platinum
La Trypsin Gold tiene una especificidad de digestión máxima y una resistencia extrema a la digestión autolítica. Está cualificada tanto para la digestión en gel como para la digestión en solución y está disponible en alícuotas liofilizadas de 100μg. Se ha sometido a un paso adicional de control de calidad por espectrometría de masas para garantizar la compatibilidad aplicación/instrumentación.
La Trypsin Platinum es una proteasa recombinante diseñada para usuarios que buscan una caracterización precisa de proteínas con espectrometría de masas y RP-HPLC-UV. Está libre de cualquier actividad proteolítica inespecífica detectable. Un novedoso método de modificación química asegura la máxima resistencia autoproteolítica. La Trypsin Platinum tiene una alta eficiencia proteolítica y está libre de proteínas contaminantes de origen animal.
Immobilized Trypsin
La Immobilized Trypsin proporciona un método rápido y cómodo para digerir una serie de concentraciones de proteínas purificadas o mezclas de proteínas complejas. La digestión se produce en una columna de centrifugación en tan sólo 30 minutos, y los péptidos digeridos se separan fácilmente de la tripsina inmovilizada a medida que fluyen hacia el tubo de recogida. El protocolo puede ajustarse fácilmente a varias concentraciones de proteínas sin necesidad de agitar ni de realizar baños de agua.
Trypsin/Lys-C Mix, Mass Spec Grade
De forma habitual, las proteasas tripsina y Lys-C se utilizan en combinación para digerir proteínas proteolíticamente resistentes. Trypsin/Lys-C Mix es una mezcla única de Trypsin Gold, Mass Spectrometry Grade y rLys-C, Mass Spec Grade, diseñada para mejorar la digestión de proteínas o mezclas de proteínas en solución en comparación con la tripsina sola, utilizando condiciones de digestión estándar, aumentando la recuperación de péptidos y dando como resultado una mejor cuantificación de proteínas.
Muchas proteínas son resistentes a la tripsina debido a su compacta conformación, y aunque la desnaturalización de la proteína permite la proteólisis, la tripsina es inactiva en estas condiciones. La Trypsin/Lys-C Mix supera esta barrera, ya que permanece activa incluso en condiciones de fuerte desnaturalización y es tolerante a los contaminantes inhibidores de la tripsina, lo que permite la digestión incluso de proteínas resistentes a la proteólisis.
Rapid Digestion – Trypsin y Rapid Digestion – Trypsin/Lys-C Kits
Uno de los inconvenientes de la digestión con tripsina es el largo tiempo de preparación de la muestra, que oscila entre cuatro horas y toda la noche. Para lograr una digestión eficaz es necesario desplegar primero los sustratos proteicos con tensioactivos o desnaturalizantes, como la urea o la guanidina. Sin embargo, estos productos químicos pueden tener efectos secundarios negativos y normalmente deben eliminarse antes del análisis. Con el fin de acortar el tiempo necesario de preparación de muestras para el análisis LC-MS, hemos desarrollado un protocolo optimizado en el que se consigue fácilmente una digestión rápida y eficaz en muy pocos pasos.
Los Rapid Digestion - Trypsin y Rapid Digestion - Trypsin/Lys-C Kits permiten acortar drásticamente los tiempos de reacción proteolítica mediante la digestión de proteínas a 70°C. El protocolo fácil de usar, rápido, eficaz y flexible, se adapta a una amplia gama de volúmenes de muestra y concentraciones de proteínas. La digestión se realiza completamente en solución; como la enzima no está inmovilizada en microesferas, el protocolo no requiere de agitación rápida ni de filtrado off-line para eliminar las microesferas. No se requieren desnaturalizantes químicos, material de laboratorio especial ni desalación off-line por lo que no es necesaria la limpieza de muestras para la LC-MS posterior, lo que reduce el tiempo de preparación y la pérdida de muestras.
