Inhibidores de la RNasa
Miles de artículos han citado los RNasin® Ribonuclease Inhibitors como fuente de protección contra las RNasas desde que Promega introdujo los RNasin® Inhibitors hace más de 35 años, lo que los convierte en los reactivos más fiables para proteger el ARN. Los RNasin® RNase Inhibitors actúan uniéndose fuertemente a las RNasas, impidiendo que degraden moléculas de ARN vulnerables durante la manipulación en el laboratorio. Los inhibidores de RNasa eficaces satisfacen tres criterios principales: 1) Protegen el ARN y no introducen ARNasas; 2) Son compatibles con condiciones experimentales utilizadas en múltiples aplicaciones; y 3) Funcionan de forma rápida. RNAsin cumple todos estos criterios.
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Introducción a los inhibidores de la RNasa
La contaminación por ribonucleasas (RNasas) es siempre una preocupación cuando se realizan experimentos con ARN. Incluso con las técnicas más limpias, la contaminación por RNasa puede ocurrir y puede tener efectos importantes en los datos de las aplicaciones posteriores. Un ARN intacto y de alta calidad es crucial para el éxito de aplicaciones sensibles como RT-qPCR, ensayos de unión ARN-proteína, análisis de microarrays y secuenciación de ARN.
Aunque el ARN purificado puede no contener RNasas y podría estar perfectamente intacto, las RNasas pueden introducirse durante la manipulación posterior. Las RNasas pueden introducirse en el laboratorio de muchas maneras, desde las manos sin protección hasta las ventanas abiertas y las rejillas de ventilación, siendo los resultados los mismos: ARN degradado y, en última instancia, experimentos comprometidos. Las pipetas pueden utilizarse tanto para el trabajo con plásmidos como para la preparación de reacciones de RT-PCR y convertirse en una fuente de RNasas exógenas. Incluso los manipuladores de líquidos robóticos utilizados como herramientas de laboratorio multiuso, que en un momento realizan purificaciones de plásmidos y en otro purifican ARN y montan reacciones de RT-PCR, podrían convertirse en una fuente de contaminación de RNasas.
Existen numerosos inhibidores de la RNasa disponibles en el mercado, diseñados para proteger experimentos sensibles basados en el ARN. El inhibidor de ribonucleasas de placenta es una proteína de 50kDa que inhibe la RNasa uniéndola en una proporción 1:1 con una constante de asociación superior a 1016 M–1 (1) . Se expresa como un polipéptido de cadena única que consta de 460 residuos de aminoácidos y contiene repeticiones ricas en leucina, un motivo comúnmente asociado con las interacciones proteína:proteína. El RNasin® Ribonuclease Inhibitor es un inhibidor no competitivo de las RNasas A, B y C, de la RNasa de placenta humana y de la angiogenina. Aunque el RNasin® Ribonuclease Inhibitor afecta a un amplio espectro de RNasas, no inhibe otras nucleasas, transcriptasas inversas o polimerasas.
Promega ofrece el RNasin® Ribonuclease Inhibitor nativo y recombinante, así como RNasin® Plus, que ofrece una mayor resistencia a la oxidación y es estable hasta 15 minutos a 70°C.
1. Dickson, K.A., Haigis, M.C. y Raines, R.T. (2005) Ribonuclease inhibitor: Structure and function. Prog. Nucleic Acid Res. Mol. Biol. 80, 349–74.
